本试验采用Agilent Seahorse XFe96平台进行。

线粒体压力测试实验通过依次加入线粒体电子传递链（ETC）的靶向药物测量细胞的氧 气消耗速率（OCR）而得到反映线粒体功能的关键参数，包括 basal respiration、ATP-linked respiration、proton leak、maximal respiration、spare respiratory capacity 和 nonmitochondrial oxygen consumption。 

该实验使用的药物为 oligomycin、FCCP、rotenone/antimycin A，加入顺序及 ETC 靶点如附图，以下为药物的原理解释： 

Oligomycin：该药物抑制 ATP 合酶（即复合物Ⅴ），在测量细胞基础呼吸后第一个加入，该 药可以影响或降低通过 ETC 的电子流，引起线粒体呼吸或 OCR 减少，这部分减少的 OCR 与 细胞 ATP 合成相关。

FCCP：该药在 oligomycin 后加入，是一种解偶联剂，加入该药会破坏质子梯度和线粒体膜 电位，引起电子在 ETC 不受限制地传递，同时复合物Ⅳ的耗氧达到最大。FCCP 刺激的 OCR 可被用来计算细胞备用呼吸能力（该值为最大呼吸与基础呼吸的差值），备用呼吸能力代表 细胞对能量需求增加或在压力下作出反应的能力。 

rotenone/antimycin A：第三次加入的药物，是rotenone和antimycin A的混合物。Rotenone 是复合物Ⅰ的抑制剂，antimycin A 是复合物Ⅲ的抑制剂。这两种药物可关闭线粒体呼吸， 从而能够计算出由线粒体之外活动所驱动的非线粒体呼吸耗氧。 

basal respiration：用于满足细胞的 ATP 需求和质子漏的耗氧。代表细胞在基础状态下的能 量需求。

ATP-linked respiration：加入 oligomycin 后产生的耗氧下降部分，占基础呼吸耗氧的一部 分，用于驱动 ATP 合成。代表线粒体满足细胞能量需求的 ATP 合成能力。 

proton leak：基础呼吸减去 ATP 相关呼吸的剩余耗氧，该部分氧气消耗未偶联 ATP 合成。 质子漏可作为线粒体损伤的标志，也可被认为是调节线粒体 ATP 合成的一种机制。

maximal respiration：加入 FCCP 后获得的细胞最大耗氧。FCCP 通过刺激细胞呼吸链以最 大能力工作，来模拟一种生理上的“能量需求”，这引起了底物（糖、脂肪、氨基酸）的快速 氧化以应对这种代谢挑战。代表了细胞能够实现的最大呼吸速率。 

spare respiratory capacity：最大呼吸减去基础呼吸的耗氧。代表细胞对能量需求的潜在响 应能力以及细胞基础呼吸与理论呼吸最大值间的差距，细胞响应需求的能力可作为细胞适应 性或灵活性的指标。

non-mitochondrial oxygen consumption： 加入 rotenone 和 antimycin A 后仍持续的耗 氧，这是由一部分细胞酶继续耗氧产生的。该参数对于精确测量线粒体呼吸功能非常重要。