本试验采用Agilent Seahorse XFe96平台进行。
葡萄糖在胞浆中转化为丙酮酸，进一步转化为乳酸，并向细胞外环境中释放质子，引起 胞外环境的酸化，本实验即测量细胞的胞外酸化率（ECAR）。本实验通过 依次加入glucose、oligomycin和2-DG来得到反映细胞糖酵解功能的参数，包括Glycolysis、 Glycolytic capacity、Glycolytic reserve 和 Non-glycolytic acidification。
Glucose：实验第一次加入的药物是饱和浓度的葡萄糖，细胞通过糖酵解途径利用该葡萄糖 并将其分解为 pyruvate，产生 ATP、NADH、水和质子。质子释放入胞外环境引起 ECAR 的 迅速升高，这种由葡萄糖诱导的细胞应答被称为细胞在基础条件下的糖酵解能力。
Oligomycin：实验第二次加入的药物为 oligomycin，ATP 合酶的抑制剂，可抑制线粒体 ATP 产生，从而将能量产生转移至糖酵解通路，引起 ECAR 进一步升高，反映了细胞最大的糖酵 解能力。
2-DG（2-deoxy-glucose）：2-DG 是最后加入的药物，该药通过竞争性结合糖酵解途径的 己糖激酶而抑制糖酵解，引起 ECAR 降低从而证实实验中 ECAR 的产生来源于糖酵解途径。
Glycolysis：葡萄糖转化为丙酮酸的过程，本实验中加入饱和浓度葡萄糖后细胞达到的 ECAR 值，反映细胞在基础条件下的糖酵解能力。
Glycolytic capacity：加入 oligomycin 后，细胞达到的最大 ECAR 值，指 oligomycin 有效关 闭了氧化磷酸化功能后，迫使细胞利用糖酵解达到的最大产生能量的能力。
Glycolytic reserve：Glycolytic capacity 与 Glycolysis 的差值，反映了细胞满足能量需求的能 力，以及糖酵解功能与细胞理论最大值之间的接近程度。
Non-glycolytic acidification：细胞外酸化的其他来源，非来自糖酵解途径。